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液氮罐超低溫保存方法詳述

時(shí)間：2018-10-21 08:36:43 來源：作者：admin

微生物都可以用超低溫來保管，超低溫保管法是適用范圍廣泛的微生物保管法。需求雜亂養(yǎng)分的微生物種，如用其他的儲(chǔ)存辦法不能堅(jiān)持其生機(jī) （如植物的病原性真菌），一般可用超低溫的辦法保管（ ATCC1983；Halliday ， Baker1985）。

此法是將凍存在小管或安瓿里的細(xì)胞以較慢的冷凍速率（1℃／分鐘）冷凍，直至—150℃，再將這些小管儲(chǔ)存在—150～－196℃的液氮中。超低溫的冷凍保護(hù)劑不同于凍干法所用的冷凍劑。ATCC 常用一種由甘油（10％）、二甲亞砜（5％）和培養(yǎng)液制成的混合劑保管大都的細(xì)胞株。

這些化學(xué) 試劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)可防止內(nèi)膜的冷凍損傷。儲(chǔ)存在低溫容器內(nèi)的細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)有必要當(dāng)心操作。當(dāng)小管被加熱時(shí)，所構(gòu)成的冰晶會(huì)將細(xì)胞殺死，正確操作就可防止這種事端。只需敏捷將樣品凍結(jié)就能削減生機(jī)的丟掉，做法是：將封口的小管敏捷放入 37℃的水中，直至一切的冰消融，然后翻開管口，將內(nèi)容物移入培養(yǎng)基。超低溫保藏的微生物有必要一直儲(chǔ)存在溫度十分低的環(huán)境中，因而需求液氮罐。在長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存的過程中有必要常常注意彌補(bǔ)液氮。

這種儲(chǔ)存辦法比凍干法需求更多的經(jīng)費(fèi)，包含為了保持儲(chǔ)存溫度所必要的勞動(dòng)力和液氮等。

1 資料病毒超低溫保管所需資料有：熱收縮塑料管（NuncCryoflex），液氮罐，防護(hù)手套和面罩，記號(hào)筆，氣體噴燈，裝液氮的保溫瓶。

2 辦法
（1）剪一段兩頭各超出冷凍管長(zhǎng)度 2cm 的熱收縮塑料管。
（2）將富含弄清病毒懸液（安排培養(yǎng)的上清培養(yǎng)基，或安排培養(yǎng)基內(nèi)的細(xì) 胞溶解產(chǎn)品均可）冰浴幾分鐘，用滅菌移液管將 0.2ml 冰浴過的上清懸液分裝到冷凍管內(nèi)，并將蓋子擰緊。
（3）將有病毒的冷凍管放入熱收縮塑料管中部，刺進(jìn)正確的標(biāo)簽。
（4）用噴燈當(dāng)心加熱熱收縮塑料管，并使之包住冷凍管。注意不要用太高的溫度加熱熱收縮塑料管。
（5）再當(dāng)心加熱熱收縮塑料管的兩頭，用大號(hào)鑷子夾緊管的端口至徹底密封。
（6）將密封好的冷凍管疾速在裝有液氮的保溫瓶中冷凍（操作時(shí)需求戴面罩和手套）。
（7）將冷凍過的冷凍管放入液氮罐中的格子內(nèi)，一起記載樣品的具體的存放方位、試驗(yàn)編號(hào)和寄存日期等。
（8）需求用時(shí)，敏捷從液氮罐內(nèi)取出所需樣品，并投入 37℃水浴箱中凍結(jié) 后，用解剖刀片在冷凍管的硅化墊圈處切開熱收縮塑料管。擰開冷凍管的蓋子時(shí) 不需求除掉熱收縮塑料管。

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